Kits para detecção das principais mutações do gene BRCA 1/2(gel de agarose)

GenePack DNA PCR para detecção de mutações relacionadas ao câncer oferece uma análise simples e conveniente de uma mutação específica.

Todos os reagentes são liofilizados e estabilizados.... facilitando o seu uso, estocagem e transporte.

INTRODUÇÃO AOS TESTES DE PARA DETECÇÃO MOLECULAR DE MUTAÇÕES ASSOCIADAS AO CÂNCES DE MAMA

Os tipos mais populares de câncer familiar são o câncer de mama e a síndrome do câncer de mama e ovário. Aproximadamente 1% de todas as mulheres apresentam uma forte predisposição genética ao câncer de mama e ovário. Mulheres que são portadoras das mutações nos genes BRCA1 ou BRCA2 apresentarão câncer, numa probabilidade de mais de 80%. Hoje, se sabe que em cada nove mulheres americanas que sobrevivem até os 90 anos, uma vai desenvolver tumor de mama. O número de casos novos de câncer de mama esperados para o Brasil em 2008 é de 49.400, com um risco estimado de 51 casos a cada 100 mil mulheres. Testes positivos não indicam certeza do surgimento do câncer, apenas indicam uma probabilidade aumentada (risco) para o seu desenvolvimento, em relação à população geral.
A análise de mutações nestes genes oferece a possibilidade para uma detecção precoce de tumor em portadores de mutações. A procura por estas mutações em um paciente em particular é muito complexa, devido à variedade de mutações descritas e devido ao envolvimento de múltiplos genes na formação de predisposição.
Entretanto, algumas mutações em BRCA1 e BRCA2 são reconhecidas como as mutações mais frequentes em casos de câncer familiar de mama e ovário. A análise destas mutações em pacientes com câncer podem revelar portadores de mutações mesmo sem o conhecimento da história familiar do paciente.

PRINCÍPIO DO TESTE

Cada kit é projetado para a detecção de uma mutação específica. A detecção da mutação é baseada na PCR tetra primer alelo-específico. Primers flanqueadores permitem a amplificação de uma região de consenso que engloba a possível mutação em todos os casos. Primers internos podem discriminar o alelo mutante de um alelo tipo selvagem pelos tamanhos de amplicons correspondentes (Figura 1):

Cada kit contém 100 tubos com Master Mix liofilizados, com os seguintes componentes:

Taq DNA polimerase mais inibidores de Taq DNA sensíveis ao calor.

• 4 primers para PCR alelo-específico.
• dNTP’s.
• Sais especiais e estabilizadores.
• bromphenol blue para aplicação em gel de agarose.
• Tubo separado de tampão de diluição.

O master mix pode ser transportado a temperatura ambiente (+15-30 °C) por mais que 1 ano sem alteração na performance de detecção da mutação.

Para dar início à PCR, deve-se adicionar DNA genômico, tampão de diluição e água. Após à PCR, o produto ser aplicado em gel de agarose.O tamanho dos fragmentos indicarão a presença ou ausência da mutação na amostra estudada.

Figura 2: gel de agarose corado com brometo de etídio contendo DNA genômico amplificado por PCR com os kits de cances de mama.
Linhas 1,2,3 – mutação não detectada.
Linha 4 – Mutação 5382insC (heterozigoto).
5 – Marcador de peso molecular